Результаты и обсуждениеСтраница 1
Выращивание штамма на 2Н2О-содержащих средах
.
Для выращивания штамма был выбран ступенчато-увеличивающийся градиент концентрации 2H2О в ростовых средах в присутствии 2 об.% [U -2H] MetOH, так как предпологалось, что постепенное привыкание клетки к 2Н2О будет оказывать благоприятный эффект на параметры роста и общее самочувствие культуры (таблица). Для компенсации ауксотрофности по лейцину эту аминокислоту добавляли в ростовую среду в протонированном виде в концентрации 10 мг/л. Сначала исходный штамм выращивали на 2Н2О-содержащих средах без его предварительной адаптации к 2Н2О, для того чтобы определить его ростовые и биосинтетические параметры на этих средах. При росте исходного штамма на контрольной среде с обычной водой продолжительность лаг-фазы и время клеточной генерации составили 20 и 2.2 ч соответственно (таблица, опыт 1). В промежуточных экспериментах эти параметры изменялись пропорционально концентрации 2Н2О. В частности, продолжительность лаг-фазы и время клеточной генерации увеличивались, а рост и уровень накопления фенилаланина уменьшались, причем самые низкие значения были зафиксированы на максимально дейтерированной среде с 98 об.% 2Н2О. Так, в эксперименте (5), таблица, выход микробной биомассы был снижен в 3.3, а уровень накопления фенилаланина в ростовой среде в 2.7 раз по сравнению с контролем, поэтому было необходимо проводить адаптацию штамма к 2Н2О.
Таблица.
Изотопный состав ростовых сред и параметры бактериального роста исходного штамма
|
|
Компоненты среды, об.% H2O 2H2O MetOH [U -2H] MetOH |
лаг-фаза (ч) |
Выход биомассы((%) |
Время генерации (ч) |
Максимальный уровень накопления фенилаланина в ростовой среде (%) | |||
|
(1) |
98 |
0 |
2 |
0 |
20 |
100.0 |
2.2 |
100.0 |
|
(2) |
73.5 |
24.5 |
0 |
2 |
34 |
85.9 |
2.6 |
97.1 |
|
(3) |
49.0 |
49.0 |
0 |
2 |
44 |
60.5 |
3.2 |
98.8 |
|
(4) |
24.5 |
73.5 |
0 |
2 |
49 |
47.2 |
3.8 |
87.6 |
|
(5) |
0 |
98.0 |
0 |
2 |
60 |
30.1 |
4.9 |
37.0 |
Клеточная адаптация к 2Н2О.
Специальный подход по адаптации заключался в серии из четырех адаптационных пассажей исходной культуры на твёрдых агаризованных средах с 2 об.% [U-2H] MetOH с 0, 24.5, 49, 73.5 и 98 об.% 2Н2О. При этом отбирали отдельные колонии, выросшие на средах с низкими концентрациями 2Н2О. Затем их последовательно пересевали на среды с большей концентрацией 2Н2О, включая среду с 98 об.% 2H2О, проводя их параллельные контрольные рассевы на протонированной среде (степень выживаемости бактерий составила не более 40%).
Популярные статьи:
Конкурентные взаимодействия во время развития
После того как аксон достигает своих мишеней и образует синаптические связи, два процесса управляют паттерном иннервации. Одним является период гибели клеток, когда большое количество нейронов, которые установили синаптические связи, поги ...
Кстати, почём органы для народа?
Специалисты из Института кибернетики города Рэдинг (США) подсчитали, во сколько обойдется сборка человека из искусственных органов. Оказалось, что не так дорого. Если в середине 1980-х годов тело, собранное из «железяк», стоило бы шесть м ...
Скорость образования амилоидных фибрилл Х-белка
Процессы формирования амилоидных фибрилл разными белками in vitro характеризуются разной скоростью (Kim et al., 2002; Stine et al., 2003; Hwang et al., 2004). Скорость фибриллообразования может зависеть от многих факторов: состава раствор ...