Результаты и обсуждение
Страница 1

Выращивание штамма на 2Н2О-содержащих средах

.

Для выращивания штамма был выбран ступенчато-увеличивающийся градиент концентрации 2H2О в ростовых средах в присутствии 2 об.% [U -2H] MetOH, так как предпологалось, что постепенное привыкание клетки к 2Н2О будет оказывать благоприятный эффект на параметры роста и общее самочувствие культуры (таблица). Для компенсации ауксотрофности по лейцину эту аминокислоту добавляли в ростовую среду в протонированном виде в концентрации 10 мг/л. Сначала исходный штамм выращивали на 2Н2О-содержащих средах без его предварительной адаптации к 2Н2О, для того чтобы определить его ростовые и биосинтетические параметры на этих средах. При росте исходного штамма на контрольной среде с обычной водой продолжительность лаг-фазы и время клеточной генерации составили 20 и 2.2 ч соответственно (таблица, опыт 1). В промежуточных экспериментах эти параметры изменялись пропорционально концентрации 2Н2О. В частности, продолжительность лаг-фазы и время клеточной генерации увеличивались, а рост и уровень накопления фенилаланина уменьшались, причем самые низкие значения были зафиксированы на максимально дейтерированной среде с 98 об.% 2Н2О. Так, в эксперименте (5), таблица, выход микробной биомассы был снижен в 3.3, а уровень накопления фенилаланина в ростовой среде в 2.7 раз по сравнению с контролем, поэтому было необходимо проводить адаптацию штамма к 2Н2О.

Таблица.

Изотопный состав ростовых сред и параметры бактериального роста исходного штамма

Компоненты среды, об.%

H2O 2H2O MetOH [U -2H]

MetOH

лаг-фаза

(ч)

Выход биомассы((%)

Время генерации

(ч)

Максимальный уровень накопления фенилаланина в ростовой среде

(%)

(1)

98

0

2

0

20

100.0

2.2

100.0

(2)

73.5

24.5

0

2

34

85.9

2.6

97.1

(3)

49.0

49.0

0

2

44

60.5

3.2

98.8

(4)

24.5

73.5

0

2

49

47.2

3.8

87.6

(5)

0

98.0

0

2

60

30.1

4.9

37.0

Клеточная адаптация к 2Н2О.

Специальный подход по адаптации заключался в серии из четырех адаптационных пассажей исходной культуры на твёрдых агаризованных средах с 2 об.% [U-2H] MetOH с 0, 24.5, 49, 73.5 и 98 об.% 2Н2О. При этом отбирали отдельные колонии, выросшие на средах с низкими концентрациями 2Н2О. Затем их последовательно пересевали на среды с большей концентрацией 2Н2О, включая среду с 98 об.% 2H2О, проводя их параллельные контрольные рассевы на протонированной среде (степень выживаемости бактерий составила не более 40%).

Страницы: 1 2 3


Популярные статьи:

Скелет конечностей
Скелет верхних конечностей состоит из пояса верхних конечностей и костей свободных конечностей. Пояс верхних конечностей образуют лопатки и ключицы. Скелет свободной верхней конечности образован плечевой костью, подвижно соединенной с ло ...

Сульфатвосстанавливающие бактерии
Микроорганизмы восстанавливают сульфат для двух целей. Во-первых, подобно большинству растений, многие бактерии способны извлекать из данного процесса серу для синтеза серосодержащих клеточных компонентов (ассимиляционная сульфатредукция) ...

Доклад
Добрый день. Меня зовут Дебдин Артем. Тема моего реферата «Причины возникновения уродств человека». Почему меня заинтересовал именно этот вопрос? Я считаю, что каждый современный образованный человек заинтересован в том, чтобы иметь здор ...