Результаты и обсуждениеСтраница 1
Выращивание штамма на 2Н2О-содержащих средах
.
Для выращивания штамма был выбран ступенчато-увеличивающийся градиент концентрации 2H2О в ростовых средах в присутствии 2 об.% [U -2H] MetOH, так как предпологалось, что постепенное привыкание клетки к 2Н2О будет оказывать благоприятный эффект на параметры роста и общее самочувствие культуры (таблица). Для компенсации ауксотрофности по лейцину эту аминокислоту добавляли в ростовую среду в протонированном виде в концентрации 10 мг/л. Сначала исходный штамм выращивали на 2Н2О-содержащих средах без его предварительной адаптации к 2Н2О, для того чтобы определить его ростовые и биосинтетические параметры на этих средах. При росте исходного штамма на контрольной среде с обычной водой продолжительность лаг-фазы и время клеточной генерации составили 20 и 2.2 ч соответственно (таблица, опыт 1). В промежуточных экспериментах эти параметры изменялись пропорционально концентрации 2Н2О. В частности, продолжительность лаг-фазы и время клеточной генерации увеличивались, а рост и уровень накопления фенилаланина уменьшались, причем самые низкие значения были зафиксированы на максимально дейтерированной среде с 98 об.% 2Н2О. Так, в эксперименте (5), таблица, выход микробной биомассы был снижен в 3.3, а уровень накопления фенилаланина в ростовой среде в 2.7 раз по сравнению с контролем, поэтому было необходимо проводить адаптацию штамма к 2Н2О.
Таблица.
Изотопный состав ростовых сред и параметры бактериального роста исходного штамма
|
|
Компоненты среды, об.% H2O 2H2O MetOH [U -2H] MetOH |
лаг-фаза (ч) |
Выход биомассы((%) |
Время генерации (ч) |
Максимальный уровень накопления фенилаланина в ростовой среде (%) | |||
|
(1) |
98 |
0 |
2 |
0 |
20 |
100.0 |
2.2 |
100.0 |
|
(2) |
73.5 |
24.5 |
0 |
2 |
34 |
85.9 |
2.6 |
97.1 |
|
(3) |
49.0 |
49.0 |
0 |
2 |
44 |
60.5 |
3.2 |
98.8 |
|
(4) |
24.5 |
73.5 |
0 |
2 |
49 |
47.2 |
3.8 |
87.6 |
|
(5) |
0 |
98.0 |
0 |
2 |
60 |
30.1 |
4.9 |
37.0 |
Клеточная адаптация к 2Н2О.
Специальный подход по адаптации заключался в серии из четырех адаптационных пассажей исходной культуры на твёрдых агаризованных средах с 2 об.% [U-2H] MetOH с 0, 24.5, 49, 73.5 и 98 об.% 2Н2О. При этом отбирали отдельные колонии, выросшие на средах с низкими концентрациями 2Н2О. Затем их последовательно пересевали на среды с большей концентрацией 2Н2О, включая среду с 98 об.% 2H2О, проводя их параллельные контрольные рассевы на протонированной среде (степень выживаемости бактерий составила не более 40%).
Популярные статьи:
Дневные полезные хищные птицы
1. Балобан (Falco cherrug Gray), молд. шойм дунэрям
Балобан величиной немного превосходит серую ворону. Длинна его тела 425—591 мм, размах крыльев 1004 1300 мм, вес 890—1200 г. Хвост сравнительно длинный и закругленный, пальцы короткие, ...
Размножение
Для большинства жгутиконосцев известен только бесполый способ размножения делением надвое. Деление всегда происходит в продольном направлении, т.е. плоскость деления совпадает с продольной осью тела. Часто деление совершается в свободнопо ...
Задумывается ли он о своих достижениях
"Я мало думаю о прошлом. По-прежнему думаю о том, сможем ли мы найти гены, отвечающие за умственные расстройства, пока мой ум еще жив, и сможем ли мы за десять лет победить рак, и . научусь ли я когда-нибудь лучше подавать в теннисе ...