Количественный учет. Определение количества клеток высевом на плотные питательные (метод Коха)

Этот метод позволяет на основании числа колоний, выросших после посева на плотную питательную среду определенного объема исследуемой суспензии, судить об исходном содержании в ней клеток микроорганизмов [13]. Определение числа клеток микроорганизмов включает три этапа.

1. Приготовление разведений. Численность популяции микроорганизмов обычно велика, поэтому для получения изолированных колоний необходимо приготовить ряд последовательных разведений. В начале было приготовлено разведение в 100 раз (10-2), для этого подвешивали 1 г почвы на часовом стекле и переносили в колбу со 100 мл 0,85% NaCl и гомогенизировали (гомогенизатор Gomogenizer type – 302, Польша) 5 мин при 400 об/мин. Затем из гомогенизированного раствора отбирали 1 мл жидкости и переносили в пробирку с 9 мл стерильного 0,85% NaCl, это разведение уже в 1000 раз (10-3). Таким же образом были приготовлены и последующие разведения до 10-10.

2. Посев. С полученных разведений исследуемых образцов производится посев глубинным способом. При глубинном посеве точно измеренный объём (1,0 мл) разведения вносят стерильной пипеткой в 2–4 стерильные чашки Петри. Затем заливают чашки 15–20 мл расплавленной и остуженной до 48 – 50°С питательной средой. Когда среда застывает, чашки Петри в перевернутом виде заворачивают в бумагу и помещают в термостат (28°С).

3. Подсчет выросших колоний. Колонии микроорганизмов в зависимости от скорости роста подсчитывают через 2 – 15 суток инкубации. Подсчет проводят не открывая чашек Петри.

Чашечный метод Коха использовали для подсчета численности сапротрофов и азотфиксаторов.

Популярные статьи:

Основы клонирования, техника клонирования, клонирование ДНК
Основные методы инженерии были разработаны вначале 70-х гг. Суть этих методов - введение в организм нового гена. Такой ген может быть синтезирован заново, а может быть перенесен из другого организма. Если в геном бактерии встроить ген, ко ...

Трансформация кристаллов при переносе из водной среды в воздушную
Структура простых химических веществ также изменяется при переносе в среды с различным содержанием воды. Детально изученный пример такого рода – снежинки. По мере перемещения снежинок из воздуха в тучу, а затем снова в воздух форма криста ...

Эволюционная характеристика мутаций
Важнейшими с эволюционной точки зрения характеристиками мутаций являются частота возникновения и встречаемость их в природных популяциях, а также влияние мутаций на те или иные признаки организма. Частота возникновения отдельных спонтанн ...