Количественный учет. Определение количества клеток высевом на плотные питательные (метод Коха)

Материалы » Изучение численности отдельных физиологических групп почвенных микроорганизмов в зависимости от антропогенной нагрузки » Количественный учет. Определение количества клеток высевом на плотные питательные (метод Коха)

Этот метод позволяет на основании числа колоний, выросших после посева на плотную питательную среду определенного объема исследуемой суспензии, судить об исходном содержании в ней клеток микроорганизмов [13]. Определение числа клеток микроорганизмов включает три этапа.

1. Приготовление разведений. Численность популяции микроорганизмов обычно велика, поэтому для получения изолированных колоний необходимо приготовить ряд последовательных разведений. В начале было приготовлено разведение в 100 раз (10-2), для этого подвешивали 1 г почвы на часовом стекле и переносили в колбу со 100 мл 0,85% NaCl и гомогенизировали (гомогенизатор Gomogenizer type – 302, Польша) 5 мин при 400 об/мин. Затем из гомогенизированного раствора отбирали 1 мл жидкости и переносили в пробирку с 9 мл стерильного 0,85% NaCl, это разведение уже в 1000 раз (10-3). Таким же образом были приготовлены и последующие разведения до 10-10.

2. Посев. С полученных разведений исследуемых образцов производится посев глубинным способом. При глубинном посеве точно измеренный объём (1,0 мл) разведения вносят стерильной пипеткой в 2–4 стерильные чашки Петри. Затем заливают чашки 15–20 мл расплавленной и остуженной до 48 – 50°С питательной средой. Когда среда застывает, чашки Петри в перевернутом виде заворачивают в бумагу и помещают в термостат (28°С).

3. Подсчет выросших колоний. Колонии микроорганизмов в зависимости от скорости роста подсчитывают через 2 – 15 суток инкубации. Подсчет проводят не открывая чашек Петри.

Чашечный метод Коха использовали для подсчета численности сапротрофов и азотфиксаторов.


Популярные статьи:

Никотин и его воздействие на организм
Никотин не менее опасен, чем алкоголь. Само зачатие может стать проблемой, т.к. у курящих женщин на треть увеличивается риск бесплодия. Дети курильщиц часто появляются на свет с меньшим весом и отклонениями в психике, страдают одышкой, с ...

Место формирования сапиенса
"Процессы сапиентации, как об этом свидетельствуют палеоантропологические данные, происходили в различных районах Старого Света, хотя и с разной скоростью. Здесь могли играть роль различные обстоятельства, особенности окружающей сред ...

Состояния множества частиц в Пространстве
Движение множества частиц во всевозможных направлениях, столкновения друг с другом приводит к тому, что они распределяются в Пространстве так, что возможность взаимостолкновений со всех сторон становится одинаковой, то есть становится со ...