Количественный учет. Определение количества клеток высевом на плотные питательные (метод Коха)

Материалы » Изучение численности отдельных физиологических групп почвенных микроорганизмов в зависимости от антропогенной нагрузки » Количественный учет. Определение количества клеток высевом на плотные питательные (метод Коха)

Этот метод позволяет на основании числа колоний, выросших после посева на плотную питательную среду определенного объема исследуемой суспензии, судить об исходном содержании в ней клеток микроорганизмов [13]. Определение числа клеток микроорганизмов включает три этапа.

1. Приготовление разведений. Численность популяции микроорганизмов обычно велика, поэтому для получения изолированных колоний необходимо приготовить ряд последовательных разведений. В начале было приготовлено разведение в 100 раз (10-2), для этого подвешивали 1 г почвы на часовом стекле и переносили в колбу со 100 мл 0,85% NaCl и гомогенизировали (гомогенизатор Gomogenizer type – 302, Польша) 5 мин при 400 об/мин. Затем из гомогенизированного раствора отбирали 1 мл жидкости и переносили в пробирку с 9 мл стерильного 0,85% NaCl, это разведение уже в 1000 раз (10-3). Таким же образом были приготовлены и последующие разведения до 10-10.

2. Посев. С полученных разведений исследуемых образцов производится посев глубинным способом. При глубинном посеве точно измеренный объём (1,0 мл) разведения вносят стерильной пипеткой в 2–4 стерильные чашки Петри. Затем заливают чашки 15–20 мл расплавленной и остуженной до 48 – 50°С питательной средой. Когда среда застывает, чашки Петри в перевернутом виде заворачивают в бумагу и помещают в термостат (28°С).

3. Подсчет выросших колоний. Колонии микроорганизмов в зависимости от скорости роста подсчитывают через 2 – 15 суток инкубации. Подсчет проводят не открывая чашек Петри.

Чашечный метод Коха использовали для подсчета численности сапротрофов и азотфиксаторов.


Популярные статьи:

Черенкование и посадка. Черенкование
Черенкование растений производилось 3 июня 2008 года во второй половине дня. Всего было подготовлено по 20 черенков каждого вида растений длиной от 9см до 15см. С маточного растения туи западной черенки обрывались со средней части вместе ...

Получение Нобелевской премии
В 1962 году Уотсон, Крик и Уилкинс получили Нобелевскую премию по физиологии и медицине, но к тому времени Франклин, чьи данные позволили сделать их открытие, уже умерла, в возрасте 37 лет, от рака яичников. Когда в 1968 году Уотсон описа ...

Симметрия природы
Начало стройной симметрии заложила физика в теории кри­сталлов, что зафиксировано в работах И. Ф. Гесселя (1796 -1872) в 1830 г., Л. В. Гадолина (1828 - 1892) в 1867г., А. Шенфлиса (1853 - 1928) в 1890 г. Первоначально речь шла о геометри ...