Загрузка геля. Ширина белковых полос
Страница 2

Материалы » Полиакриламидный гель (ПААГ) » Загрузка геля. Ширина белковых полос

Если стаканы одинакового диаметра были залиты первоначально до одинакового уровня, а суммарный объем жидкости в них равен объему формы, то на дно ее будет поступать постепенно все более плотная жидкость, которая, растекаясь по дну, станет оттеснять вверх все более легкие слои. В итоге, после полимеризации у дна окажется мелкопористый 20%-ный гель, а наверху — крупнопористый, 5%-ный. Изменение это будет линейным по высоте пластины.

При миграции белковых зон в таком «градиентном» геле передний край каждой полосы будет постоянно оказываться в области чуть-чуть более концентрированного геля, чем ее задний край. Молекулы белка, расположенные ближе к переднему краю полосы будут тормозиться трением о гель сильнее, чем идущие сзади, что и приведет к непрерывному сужению полос в ходе их продвижения вниз по гелю.

Существует множество фирменных приборов для проведения электрофореза белков в вертикальных пластинках. В некоторых из них предусмотрено охлаждение поверхностей стеклянной формы геля, например, током буфера, прокачиваемого между резервуарами. Проблемы теплоотвода от геля мы коснулись, говоря о недостатках гелей в трубочках. Для пластин с толщиной геля в 1 мм естественное воздушное охлаждение является вполне достаточным. Для более толстых гелей охлаждение циркулирующей водной средой оправдано.

Некоторые фирмы выпускают приборы для электрофореза в горизонтально расположенных пластинах. В этом есть свои преимущества. К примеру, пластину с гелем можно положить на охлаждаемый столик. Но есть и недостатки. Хотя бы уже упомянутое обсыхание фитилей, без которых в этих системах нельзя обойтись. А также необходимость защиты от обсыхания и самого геля, который в этих вариантах открыт сверху для наложения фитилей (гель лежит на одной пластинке). Препараты в этих моделях вносят в «колодцы», расположенные с одного края геля перпендикулярно его плоскости. Можно их расположить и на середине геля для того, чтобы в одном опыте разделять и основные, и кислые белки — они будут мигрировать в разные стороны. С проблемой обсыхания стараются справиться закрывая весь прибор (резервуары, фитили и гель) герметической крышкой из плексигласа.

Страницы: 1 2 


Популярные статьи:

Серна
Rupicapra rupicapra Linnaeus, 1758 Отряд Парнокопытные – Artiodactyla Семейство Полорогие – Bo Статус. Категория III – редкий вид. Краткое описание. Стройное животное с сильным укороченным туловищем, длиной 125 – 135 см, высота в холк ...

Выводы
1.Крупнейшие философские концепции XX столетия активно обращаются к феномену науки, определяют место и роль научной рациональности в системе других способов отношения к миру. Большинство философов науки едины во мнении о том, что отчетлив ...

Размножение
Корсаки – моногамны; пары у них, по-видимому, сохраняются на всю жизнь. Гон наблюдается в январе – феврале, обычно по ночам, и сопровождается лаем самцов и стычками за молодых или «холостых» самок. Спаривание происходит в норе. Продолжит ...