Перенос чужеродной ДНК в протопласты

Материалы » Перенос чужеродной ДНК в протопласты » Перенос чужеродной ДНК в протопласты

Проблема создания векторов для введения чужеродной ДНК в протопласты растений является наиболее сложной. Здесь наметились следующие подходы:1) использование плазмид бактерий, заражающих растения в естественных условиях; при этом часть плазмиды встраивается в ядерный геном растения-хозяина и функционирует в составе его генома;2) использование бактериальных плазмид, «сшитых» с фрагментами ДНК хлоропластов или митохондрий растений, для создания челночных векторов, способных к репликации в клетках прокариот и экспрессии в эукариотических клетках;3) использование ДНК-содержащих вирусов растений; в такой системе ДНК функционирует автономно от генома растения-хозяина.

Для переноса чужеродной ДНК в растения наиболее широко используется агробактериальная трансформация с помощью бинарных плазмидных векторов.

Практикуются также методы переноса генов в растения путем электропорации, трансформации растительных протопластов чужеродной ДНК в присутствии полиэтиленгликоля, микроинъекцией ДНК, биологической бомбардировкой золотыми или вольфрамовыми частицами, покрытыми молекулами ДНК, введением плазмидной ДНК с помощью игольчатых кристаллов карбида или нитрида кремния и др.

Но все эти способы получения трансгенных растений так или иначе основаны на использовании селективных маркерных генов, которыми обычно служат бактериальные гены устойчивости к антибиотикам или гербицидам.

Иными словами, тот фрагмент ДНК, который исследователь вводит в геном трансформируемого растения, помимо нужного гена, содержит и маркерный ген.

Эти селективные маркерные гены нужны для того, чтобы в лаборатории в процессе регенерации отделить единичные трансформированные клетки от нетрансформированных (которых большинство) и дать первым преимущество при делении.

В результате трансгенное растение, полученное из таких трансформированных клеток, становится устойчивым к определенному антибиотику (чаще всего к канамицину) или к какому-нибудь гербициду вроде глифосата. При последующем выращивании трансгенных растений в полевых условиях появляется теоретическая возможность перемещения генов резистентности к гербициду в родственные сорняки или генов резистентности к антибиотику назад в бактерии почвы. Именно здесь и заключается определенная экологическая опасность ввиду вероятности появления, в частности, так называемых суперсорняков.

Однако в целом ряде работ было показано, что такое событие крайне маловероятно. Более того, выращивание так называемых транспластомных растений (на которых остановимся чуть ниже) сводит часть этих опасений к нулю, ввиду того, что пыльца у таких растений остается не трансгенной. [8]

К тому же процессы переноса генов, хотя и с чрезвычайно низкой частотой, но происходят в самой природе с помощью бактерии Agrobacterium tumefaciens, которую даже называют «природным генным инженером», и поэтому такие измененные самой Природой растения нас уже давно окружают.


Популярные статьи:

Рамапитеки
В качестве предков человека некоторые указывают на рамапитека. Его рассматривали как самостоятельный род высокоразвитых гоминоидов. Рамапитек - представитель ископаемых человекообразных обезьян, обитавших около от14 до 10 млн. лет назад ...

Органы размножения самок
Органы размножения самки птиц служат для воспроизведения потомства, что обеспечивает сохранение вида. Функция органов размножения связана с функцией других органов и регулируется нейрогуморальными механизмами. Органы размножения самки пт ...

Полив
Полив — очень ответственный момент. Азалия несолеустойчива, поэтому вода для полива должна иметь жесткость 1,4 — 1,75 мг.экв/л. В более мягкую воду до­бавляют кальциевую селитру, поскольку без кальция появляются признаки его недостатка и ...