ДетергентыСтраница 2
Необходимость поддержания концентрации детергента на определенном уровне создает дополнительнее трудности помимо тех, с которыми обычно сталкиваются при очистке белков; о некоторых из них мы уже говорили. Проблемы возникают и при использовании стандартного метода высаливания при высокой концентрации сульфата аммония: во многих случаях белок осаждается в комплексе с детергентом и липидом. Поскольку солевой раствор имеет высокую плотность, а детергент в агрегате — относительно низкую, то при центрифугировании преципитат будет оставаться на поверхности. Важно помнить, что очистке подвергаются белково-детергентные комплексы, нередко со значительным количеством связанного фосфолипида. Это сказывается на качестве разделения при хроматографировании, а также на результатах характеристики конечного прорастворимых белков, нужно определить число и молекулярную массу полипептидных субъединиц, их стехиометрию, размер и, возможно, форму молекулы, а также, если это необходимо, биохимическую активность.
|
Детергент 1 В табл. 1 и 2 перечислены наиболее широко используемые детергенты и указаны их свойства, важные для обсуждаемых нами вопросов. Эмпирически наиболее эффективными являются: 1) неионные детергенты (тритон Х-100, октилглюкозид); 2) соли желчных кислот (холат, дезоксихолат); 3) цвиттерионные детергенты (CHAPS, цвнттергент). Но выбор детергента, наиболее приемлемого для солюбилизации и очистки определенного мембранного фермента, по-прежнему осуществляется методом проб и ошибок. |
ККМ, мМ |
Мол.масса |
1 Размер А мнцеллы |
.грегационис число |
х Удельный объем, мл/г |
Ссылки |
|
Долецилсульфат |
1,33 |
288 |
24 500 |
85 |
0,864 | |
|
натрия | ||||||
|
Холат натрия " |
3 |
408 |
2100 |
5 |
0,778 |
(612, 1383] |
|
Дезоксихолат |
0,91 |
392 |
23 000 |
55 |
0,771 | |
|
натрия " | ||||||
|
0,11 |
538 |
68 000 |
12 |
0,973 | ||
|
Тритои Х-100 2) |
0,24 |
628 |
90 000 |
140 |
0,908 | |
|
Твин 80 2) |
0,012 |
1300 |
76 000 |
60 |
0,8% | |
|
Лаурилдиметил- |
2,2 |
229 |
17 000 |
75 |
1,112 |
|612] |
|
аминоксид | ||||||
|
^-D-Октил- |
25 |
293 |
8000 |
27 |
0,820 |
[1242, 1213 |
|
глюкозид |
612] | |||||
|
^-D-Лаурил- |
0,16 |
510 |
50 000 |
98 |
0,820 | |
|
мальтозид | ||||||
|
CHAPS |
8 |
615 |
6150 |
10 |
0,802 | |
|
Цвиттергеит |
3,6 |
335 |
— |
— |
0,957 |
Популярные статьи:
Меристематическая культура.
Для меристематической культуры используют меристему - образовательную ткань растений, долго сохраняющую способность к делению и образованию новых клеток и отличающуюся высокой метаболической активностью. Для культивирования изолируют кон ...
Эволюция жизни на Земле
В настоящее время, да, наверное, и в будущем, наука не сможет дать ответ на вопрос, как выглядел самый первый организм, появившийся на Земле, - предок, от которого берут начало три основные ветви древа жизни. Одна из ветвей - эукариоты, к ...
Экспрессия генов в развивающейся нервной системе
позвоночных
Возникновение ЦНС из недифференцированных клеток эктодермы до настоящего времени остается одним из самых загадочных процессов в эмбриогенезе позвоночных. Считается, что исходно клетки эктодермы не имеют самостоятельного нейрогенного потен ...