Детергенты
Страница 2

Мембранные белки » Детергенты

Необходимость поддержания концентрации детергента на определенном уровне создает дополнительнее трудности помимо тех, с которыми обычно сталкиваются при очистке белков; о некоторых из них мы уже говорили. Проблемы возникают и при использовании стандартного метода высаливания при высокой концентрации сульфата аммония: во многих случаях белок осаждается в комплексе с детергентом и липидом. Поскольку солевой раствор имеет высокую плотность, а детергент в агрегате — относительно низкую, то при центрифугировании преципитат будет оставаться на поверхности. Важно помнить, что очистке подвергаются белково-детергентные комплексы, нередко со значительным количеством связанного фосфолипида. Это сказывается на качестве разделения при хроматографировании, а также на результатах характеристики конечного прорастворимых белков, нужно определить число и молекулярную массу полипептидных субъединиц, их стехиометрию, размер и, возможно, форму молекулы, а также, если это необходимо, биохимическую активность.

Детергент 1

В табл. 1 и 2 перечислены наиболее широко используемые детергенты и указаны их свойства, важные для обсуждаемых нами вопросов. Эмпирически наиболее эффективными являются: 1) неионные детергенты (тритон Х-100, октилглюкозид); 2) соли желчных кислот (холат, дезоксихолат); 3) цвиттерионные детергенты (CHAPS, цвнттергент). Но выбор детергента, наиболее приемлемого для солюбилизации и очистки определенного мембранного фермента, по-прежнему осуществляется методом проб и ошибок.

ККМ, мМ

Мол.масса

1 Размер А мнцеллы

.грегационис число

х Удельный объем, мл/г

Ссылки

Долецилсульфат

1,33

288

24 500

85

0,864

натрия

Холат натрия "

3

408

2100

5

0,778

(612, 1383]

Дезоксихолат

0,91

392

23 000

55

0,771

натрия "

0,11

538

68 000

12

0,973

Тритои Х-100 2)

0,24

628

90 000

140

0,908

Твин 80 2)

0,012

1300

76 000

60

0,8%

Лаурилдиметил-

2,2

229

17 000

75

1,112

|612]

аминоксид

^-D-Октил-

25

293

8000

27

0,820

[1242, 1213

глюкозид

612]

^-D-Лаурил-

0,16

510

50 000

98

0,820

мальтозид

CHAPS

8

615

6150

10

0,802

Цвиттергеит

3,6

335

0,957

Страницы: 1 2 3


Популярные статьи:

Меристематическая культура.
Для меристематической культуры используют меристему - образовательную ткань растений, долго сохраняющую способность к делению и образованию новых клеток и отличающуюся высокой метаболической активностью. Для культивирования изолируют кон ...

Эволюция жизни на Земле
В настоящее время, да, наверное, и в будущем, наука не сможет дать ответ на вопрос, как выглядел самый первый организм, появившийся на Земле, - предок, от которого берут начало три основные ветви древа жизни. Одна из ветвей - эукариоты, к ...

Экспрессия генов в развивающейся нервной системе позвоночных
Возникновение ЦНС из недифференцированных клеток эктодермы до настоящего времени остается одним из самых загадочных процессов в эмбриогенезе позвоночных. Считается, что исходно клетки эктодермы не имеют самостоятельного нейрогенного потен ...