Определение продукции АФК фагоцитирующими клетками

После выделения макрофаги концентрировали центрифугированием. Для этого пробирку, содержащую суспензию макрофагов помещают в охлаждённую до 4°С центрифугу и центрифугируют при 1000 об/мин в течении 10 мин. Получившейся осадок клеток ресуспендируют в 200 мкл солевой буфер и оставляют на холоду на 1 час.

Для измерения продукции активных форм кислорода в ответ на стимул применялся метод люминол зависимой хемилюминесценции, основанный на окислении люминола активными формами кислород с выделением аминофталата и испусканием кванта света. Для этого в ячейку помещали 500 мкл среды регистрации с pH=7.6, содержащей 0.9% NaCl; 5 mM HEPES; 5 mM глюкозы; 1 mM CaCl2 и 10-4 моль люминола, добавляли суспензию клеток и, через определённое время инкубации, добавлялся PMA (10-6 моль/л), в качестве стимула. Хемилюминесценцию регистрировали на люменометре “Биотокс -7”

Популярные статьи:

Репарация ДНК в мозге животных
Действие систем "ремонта", репарации ДНК в любой клетке является необходимым условием нормального функционирования ее генетического аппарата. Этот процесс особенно важен для клеток долгоживущих, медленно обновляющихся популяций, ...

Аппарат Гольджи: сортировка белков и передача сигнала
Комплекс Гольджи функционирует на пересечении секреторных путей, осуществляя прием вновь синтезированных белков и липидов из ЭР , их ковалентную модификацию, а затем - сортировку продуктов реакций согласно их назначениям ( Рис. 1 gg ). В ...

Водоросли. Строение. Классификация. Питание. Размножение. Значение в природе и хозяйственной деятельности человека
Водоросли - низшие растения, обитающие преимущественно в воде, а также на сырой почве, камнях и стволах деревьев. Среди водорослей встречаются одноклеточные, колониальные и многоклеточные формы. Тело многоклеточных водорослей не имеет нас ...