Определение продукции АФК фагоцитирующими клетками

После выделения макрофаги концентрировали центрифугированием. Для этого пробирку, содержащую суспензию макрофагов помещают в охлаждённую до 4°С центрифугу и центрифугируют при 1000 об/мин в течении 10 мин. Получившейся осадок клеток ресуспендируют в 200 мкл солевой буфер и оставляют на холоду на 1 час.

Для измерения продукции активных форм кислорода в ответ на стимул применялся метод люминол зависимой хемилюминесценции, основанный на окислении люминола активными формами кислород с выделением аминофталата и испусканием кванта света. Для этого в ячейку помещали 500 мкл среды регистрации с pH=7.6, содержащей 0.9% NaCl; 5 mM HEPES; 5 mM глюкозы; 1 mM CaCl2 и 10-4 моль люминола, добавляли суспензию клеток и, через определённое время инкубации, добавлялся PMA (10-6 моль/л), в качестве стимула. Хемилюминесценцию регистрировали на люменометре “Биотокс -7”

Популярные статьи:

Норы, жилища и убежище
Обитает в разнообразных условиях. В лесостепи Северного Казахстана селится на опушках и полянах колков, по берегам озер, на пашнях, но прежде всего заселяет старые барсучьи норы, устроенные, как правило, на возвышенных местах вблизи или в ...

Зональное ультрацентрифугирование
Центрифугирование при очень высоких частотах вращения было рассмотрено ранее применительно к сепарации твердой и жидкой фаз. Однако первоначально намечалось как метод высокоразделяющей сепарации частиц, находящихся в растворе. При исполь ...

Особенности экологии лисиц. Систематика
Царство: Животные Тип: Хордовые Класс: Млекопитающие Отряд: Хищные Семейство: Псовые Род: Лисицы Вид: Корсак Латинское название Vulpes vulpes Крупное животное, с удлиненным туловищем, на относительно невысоких ногах. Длина тела 5 ...