Определение продукции АФК фагоцитирующими клетками

После выделения макрофаги концентрировали центрифугированием. Для этого пробирку, содержащую суспензию макрофагов помещают в охлаждённую до 4°С центрифугу и центрифугируют при 1000 об/мин в течении 10 мин. Получившейся осадок клеток ресуспендируют в 200 мкл солевой буфер и оставляют на холоду на 1 час.

Для измерения продукции активных форм кислорода в ответ на стимул применялся метод люминол зависимой хемилюминесценции, основанный на окислении люминола активными формами кислород с выделением аминофталата и испусканием кванта света. Для этого в ячейку помещали 500 мкл среды регистрации с pH=7.6, содержащей 0.9% NaCl; 5 mM HEPES; 5 mM глюкозы; 1 mM CaCl2 и 10-4 моль люминола, добавляли суспензию клеток и, через определённое время инкубации, добавлялся PMA (10-6 моль/л), в качестве стимула. Хемилюминесценцию регистрировали на люменометре “Биотокс -7”

Популярные статьи:

Численности и динамика численности
В большинстве сезонов лисица по численности в 2–5 раз превосходит корсака. Численность лисицы в 1980–1993 гг. на охваченной учетом площади в 4,2 млн. га колебалась в пределах 1600–5800 особей. Однако в последние годы из-за отсутствия спро ...

Гипотезы появления человека на Земле
Попытки понять и объяснить, как возник человек, отражены в верованиях, легендах, сказаниях самых разных народов и племен. В решении этой проблемы особенно остро проявляется борьба материалистических и идеалистических взглядов. Долгое врем ...

Воспаление
Определение понятия "воспаление". Воспаление – реакция организма на местное повреждение, характеризуется явлениями альтерации, экскреции, расстройствами микроциркуляции и пролиферацией. Этиология воспаления. Любой повреждающий ...