Определение продукции АФК фагоцитирующими клетками

После выделения макрофаги концентрировали центрифугированием. Для этого пробирку, содержащую суспензию макрофагов помещают в охлаждённую до 4°С центрифугу и центрифугируют при 1000 об/мин в течении 10 мин. Получившейся осадок клеток ресуспендируют в 200 мкл солевой буфер и оставляют на холоду на 1 час.

Для измерения продукции активных форм кислорода в ответ на стимул применялся метод люминол зависимой хемилюминесценции, основанный на окислении люминола активными формами кислород с выделением аминофталата и испусканием кванта света. Для этого в ячейку помещали 500 мкл среды регистрации с pH=7.6, содержащей 0.9% NaCl; 5 mM HEPES; 5 mM глюкозы; 1 mM CaCl2 и 10-4 моль люминола, добавляли суспензию клеток и, через определённое время инкубации, добавлялся PMA (10-6 моль/л), в качестве стимула. Хемилюминесценцию регистрировали на люменометре “Биотокс -7”

Популярные статьи:

Подтип позвоночные
Класс хрящевые рыбы К классу хрящевые рыбы относятся около 660 видов. В эту группу входят всем известные акулы (плащеносная, тигровая акула, катран) и скаты (хвостокол, пила-рыба, манта), объединяемые в два отдельных надотряда, а также ц ...

Статические показатели популяций
Статические показатели характеризуют состояние популяции на данный момент времени. К статическим показателям популяции относятся их численность, плотность и показатели структуры. Численность – это поголовье животных или количество расте ...

Мейоз. Особенности первого и второго деления мейоза. Биологическое значение. Отличие мейоза от митоза
Понимание того факта, что половые клетки гаплоидны и поэтому должны формироваться с помощью особого механизма клеточного деления, пришло в результате наблюдений, которые к тому же едва ли не впервые навели на мысль, что хромосомы содержат ...