Объекты и методы исследованийСтраница 3
Микроскопирование целлюлозоразлагающих бактерий.
Извлекают пинцетом со дна колбы кусочек разлагающейся бумаги и размазывают на предметном стекле без добавления воды. Мазок сушат обычным способом, фиксируют на пламени горелки и окрашивают фуксином.
Для накопительной культуры анаэробных целлюлозоразрушающих бактерийиспользуют среду, предложенную Имшенецким: мясопептонный бульон - 500 мл, СаСО3 – 2 г, фильтровальная бумага-15 г, водопроводная вода- 0,5 л.
Среду разливают высоким слоем в высокую пробирку. На дно опускают нарезанную полосками фильтровальную бумагу. Пробирки закрывают ватными пробками, затем пробирки стерилизуют и засевают комочком почвы или навоза. Инкубируют в течение суток в термостате при 30-35оС для обнаружения мезофильных бактерий и при 60оС – для поиска термофильных бактерий.
Через 3-4 суток при 60оС в пробирках начинается процесс разрушения клетчатки, жидкость пенится, выделяется газ. Полоски фильтровальной бумаги желтеют, ослизняются, постепенно превращаясь в аморфную массу и оседают на дно. При 30-35оС разрушение клетчатки происходит медленнее. Разрушенные массы клетчатки подвергаются микроскопическому анализу. Готовят фиксированный препарат – окрашивание фуксином (Родина, 1968).
Маслянокислое брожение крахмала исследуют на среде с картофелем. Сырой неочищенный картофель нарезают мелкими кубиками, заполняют ими 1/3 высокой пробирки, добавляют немного мела, заливают водопроводной водой на 2/3 и помещают в водяную баню при 80о на 19 мин для пастеризации. В среду не вносят ни почвы, ни маслянокислых бактерий, так как на кожуре картофеля всегда есть их споры. Элективные условия создают: крахмалом- источником углерода, используемым только микроорганизмами, содержащими фермент амилазу; пастеризацией; анаэробиозом (высокий столбик жидкости в пробирке и выделение в процессе брожения СО2 и Н2, вытесняющих воздух). Через 2-3 дня картофель всплывает вследствие бурно идущего газообразования. По окончании брожения культуральную жидкость используют для исследования морфологии маслянокислых бактерий и качественного определения продуктов брожения.
Качественная реакция на масляную кислоту.
Получение маслянокислого железа (реакция с FeCl3). Нейтральные растворы маслянокислых солей при нагревании с FeCl3 приобретают коричневое окрашивание вследствие образования маслянокислого железа. В пробирку наливают 3-5 мл сброженной жидкости, добавляют 1-2 мл 5%- ного хлорида железа и нагревают на пламени. Реакция идет по уравнению:
3Ca (CH3CH2CH2COO) 2 + 2Fe2Cl3 → 2Fe (CH3CH2CH2COO) 3 + 3CaCl2
Раствор маслянокислого железа в отраженном свете приобретает буровато-коричневое окрашивание, а в проходящем свете - кроваво-красное.
Техника посева культур микроорганизмов.
В лабораторных условиях микроорганизмы выращивают на твердых и жидких средах в пробирках, колбах или в чашках Петри.
Посевом в микробиологии называется внесение клеток микроорганизмов (посевного материала – инокулята) в стерильные среды.
Пересев- это перенос выращенной культуры микроорганизмов на питательной среде на другую свежую питательную среду.
Посев (и пересев) микроорганизмов проводят при соблюдении определенных правил стерильности, которые необходимо выполнять, чтобы предохранить исследуемую культуру от загрязнения посторонними микроорганизмами и не загрязнять окружающую среду исследуемыми культурами микроорганизмов.
Посев (или пересев) всегда проводят вблизи горелки. Пробирки при взятии мазка необходимо удерживать в наклонном положении, чтобы гарантировать стерильность культуры. Если их держать вертикально, то возможно попадание посторонних клеток микроорганизмов.
В пламени горелки тщательно обжигают бактериологическую петлю, держа ее в правой руке в отвесном положении. Мизинцем правой руки вынимают из второй пробирки ватную пробку и зажимают ее между мизинцем и ладонью, пробку первой пробирки зажимают между безымянным и средним пальцами правой руки. Снова слегка обжигают иглу и вводят ее в пробирку с культурой. Платиновая игла остывает очень быстро. Легким прикосновением ее к колонии микроорганизмов берут небольшое количество микробной массы и переносят во вторую пробирку.
Популярные статьи:
Метаболизм энкефалинов и ферменты их процессинга
Как было отмечено выше, известны три белковые молекулы, включающие в свою структуру последовательности энкефалинов: проопиомеланокортин, препроэнкефалин А (проэнкефалин), препроэнкефалин В (продинорфин). Последовательности, определяющие с ...
Годовой жизненный цикл
Из куриных перепел – единственная перелётная птица. Появляется на местах гнездований в числе последних перелётных видов, осенний отлёт происходит постепенно и малозаметен. [9]
Весной перепела появляются в последних числах марта, но брачн ...
Экономическое обоснование
Косуля является важным объектом промысловой и спортивной охоты в Амурской области. Для того, чтобы охота на неё приносила прибыль, необходимо охранять места концентрации и отёла этого вида. На территории Селемджинского района, в государст ...