Клонирование и скрининг

Материалы » Прыжки по хромосоме » Клонирование и скрининг

На этой стадии обработанные кольцевые молекулы геномной ДНК уже можно лигировать и производить селекцию сцепленных фрагментов. Для селекции геномные фрагменты встраивают в фаговый вектор, несущий амбермутации по крайней мере двух генов белковой оболочки, упаковывают фаговую ДНК in vitro и инфицируют клетки бактерии-хозяина, лишенные функции supF. Формировать бляшки на таком газоне могут только те фаговые частицы, геномы которых содержат собственные supF-гены.

Теоретически подходит любой фаговый вектор, несущий амбер-мутации и клонирующий сайт. Желательно, конечно, чтобы этот вектор обеспечивал максимальную клонирующую емкость. Идеальной можно считать ситуацию, когда кольцевые геномные фрагменты расщеплялись бы лишь частично мелкощепящим ферментом, а затем лигировались в вектор большой емкости, чтобы не было дискриминации фрагментов, обусловленной расположением сайтов рестрикции. Однако обязательные потери, происходящие при частичном расщеплении, оказываются препятствием на пути создания полной библиотеки. Имеющиеся у нас в настоящее время стандартные геномные библиотеки для «прыжков по хромосоме» были получены в результате полного расщепления кольцевых геномных фрагментов рестриктазой EcoRl. Можно использовать и другие ферменты, для которых имеются амбермутантные фаговые клонирующие векторы.


Популярные статьи:

Получение цветущей продукции
Азалию выращи­вают на субстратах, весьма разных по составу. Субст­раты на основе торфа (верхового, переходного и низин­ного): верховой чистый торф; торф и опилки (1:3 — 1:2); торф, опилки, дерновая земля (1:0,5:1). Субстраты на основе ли ...

Описание вида
Косуля – стройное и грациозное животное. Голова небольшая, с крупными подвижными ушами и выразительными миндалевидными глазами. Шея удлиненная, гибкая. Туловище вытянутое, грудная клетка округлая. Конечности стройные, с хорошо развитой му ...

Генерация движения микрофиламентами
Микрофиламенты могут генерировать движение двумя различными способами: путем скольжения — согласно этому механизму актиновые и миозиновые нити скользят друг относительно друга – или же просто путем сборки и дезагрегации пучков микрофиламе ...