Электрофорез белков в вертикальных пластинах
Страница 2

Материалы » Полиакриламидный гель (ПААГ) » Электрофорез белков в вертикальных пластинах

Препараты белков с добавленной в них сахарозой или глицерином вносят в карманы геля после окончания сборки прибора, осторожно подслаивая их, как было описано выше, под буфер. Препараты должны быть заведомо освобождены от пыли, нерастворившихся белков и других посторонних частиц фильтрованием или центрифугированием.

В верхнем и нижнем резервуарах для буфера видны проволочки электродов. Через штырьковые разъемы их присоединяют к клеммам источника питания.

В приборе описанного типа можно обойтись и без вырезов в стеклянной пластине и верхнем резервуаре, если электрическую цепь между верхним буфером и гелем замкнуть через смоченный тем же буфером широкий фитиль из толстой фильтровальной бумаги. Конструкция прибора упрощается, но при этом следует иметь в виду возможность обсыхания фитиля, что приведет к увеличению его электрического сопротивления, а следовательно к уменьшению напряжения, подающегося на гель.

По окончании электрофореза пластины разнимают, отслаивая одну из них от геля с помощью шпателя. Его всовывают между пластинами со стороны карманов и слегка поворачивают. Эту операцию не следует форсировать. Лучше сначала пройтись шпателем с легким нажимом вдоль всего верхнего края пластины, наблюдая за тем как между стеклом и гелем постепенно проникает воздух, а потом уже приподнять пластину. Со второй пластины гель снимают руками и переносят в ванночку для фиксации белков и их окраски. Эту простую операцию следует производить в перчатках. Случайное прикосновение руки к рабочей поверхности геля при современных высокочувствительных методах окрашивания может оставить на геле артефактное белковое пятно.

Я намеренно столь подробно описал операцию проведения электрофореза в этом простом устройстве, чтобы дать учащемуся или читателю представление о необходимости исключительной предусмотрительности и тщательности в постановке соответствующих экспериментов.

Страницы: 1 2 


Популярные статьи:

Вирусы
Группа микробов, не имеющих клеточной структуры, отсутствуют ядро, цитоплазма и оболочка; открыты в 1892 г. Д.И. Ивановским. Размеры очень маленькие, проходили в бактериальные фильтры, видно только в электронный микроскоп, размер между ме ...

Аутоиммунное старение
Иммунная система тесно связана с адаптацией, приспособлением организма к стрессу, вызываемому изменениями окружающей среды. Здоровая иммунная система защищает организм от вторжения вирусов, бактерий, грибков и многих других чужеродных суб ...

Развитие представлений о взаимодействии
Представления Аристотеля о взаимодействии: одностороннее воздействие движущего на движимое; первоначальная форма концепции близкодействия (передача воздействия только через посредников, при непосредственном контакте) Механическая картина ...